常見問題
多肽的溶解度很大程度上取決于多肽的極性。酸性蛋白質(zhì)溶解在堿性溶液中，而堿性蛋白質(zhì)可以溶解在酸性溶液中。含有大量不帶電荷的極性氨基酸殘基或疏水性氨基酸的疏水性多肽和中性多肽可以溶解在少量的有機溶劑如DMSO、DMF、乙酸、乙腈、甲醇、丙醇或異丙醇中，然后用水 (蒸餾水) 稀釋。含有甲硫氨酸或半胱氨酸的肽不應(yīng)溶解在DMSO中，因為DMSO可引起側(cè)鏈的氧化。
肽溶解測試: 在肽溶解之前，取一小部分肽用于肽溶解測試。您需要測試幾種不同的溶劑，直到找到最合適的溶劑 (基于實驗需要和溶解度測試)。超聲處理有助于破碎顆粒并增加溶解度。(注意: 超聲處理可引起溶液加熱和肽降解。)
1.將值-1分配給每個酸性氨基酸，包括天冬氨酸 (D)，谷氨酸 (E) 和C端-COOH。將值1分配給每個堿性氨基酸，包括精氨酸 (R)，賴氨酸 (K)，組氨酸 (H) 和N-末端-nh2。然后計算整個肽的電荷。
2.如果整個肽的電荷帶正電荷，則該肽是堿性的。嘗試先將肽溶解在蒸餾水中; 如果不溶于水，則嘗試將其溶解在少量10% 25% 的乙酸中。如果仍然失敗，則添加一些TFA (10-50微升) 以增加溶解度，然后用水稀釋至所需濃度。
3.如果整個肽帶負(fù)電荷，則該肽是酸性的。先嘗試將其溶于蒸餾水中; 如果不溶于水，則嘗試將其溶于PBS (PH 7.4) 中，如果再次不溶，則加入少量堿性溶劑，例如0.1 M碳酸氫銨，然后用水稀釋至所需濃度。含有游離半胱氨酸的肽應(yīng)溶解在脫氣的酸性緩沖液中，因為當(dāng)pH大于7時，巰基被迅速氧化成二硫化物。
4.如果整個肽的電荷為零，則該肽是中性的。中性肽通常可溶于有機溶劑。首先，嘗試添加少量乙腈，甲醇或異丙醇。對于高度疏水的肽，可以使用少量二甲基亞砜溶解，然后用水稀釋至所需濃度。對于含有游離半胱氨酸的肽，需要DMF而不是DMSO。對于具有聚集趨勢的肽，加入6 m鹽酸胍或8 m尿素，然后根據(jù)需要稀釋。
為了防止或最小化肽降解，將肽作為凍干粉末儲存在-20 °C，-80 °C是優(yōu)選的。如果需要儲存溶液肽，最好將其儲存在小樣品中，以避免重復(fù)冷凍和解凍。一個解凍和未使用的樣品應(yīng)扔掉。細菌降解有時可能是溶液肽的問題，因此請將肽溶解在無菌水中或過濾肽溶液以去除細菌。
堿性氨基酸: K，R，H，N-末端
氨基酸: D，E，C-末端
極性中性氨基酸: S，N，Q，T，C，P
非極性疏水氨基酸: G，A，M，F(xiàn)，W，V，Y，I，L乙酰基，酰胺基
示例:
KEYEFILGASRHD :( 5) (-4) = 1考慮堿性肽，參見步驟2。
地球膜GASEHK :( 4) (-5) = -1考慮酸性肽，參見步驟3
ACDEFILM GASE :( 4) (-4) = 0被認(rèn)為是中性肽，參見步驟4。
通常，酸性和堿性氨基酸的數(shù)量超過氨基酸總數(shù)的50%，并且可以用水溶解。
肽產(chǎn)品的穩(wěn)定性不僅與肽的序列有關(guān)，而且很大程度上取決于生產(chǎn)工藝，不同工藝得到的產(chǎn)品穩(wěn)定性差異很大，尤其是含有Cys、Gln、Met、Asn和Trp等氨基酸的序列。
需要長期保存的肽應(yīng)以凍干粉末的形式保存在裝有干燥劑的密封容器中，溫度為-20 ℃，-80 ℃ 更好，這樣可以最大程度地避免肽的降解。這種儲存允許肽保存數(shù)年，避免細菌降解和氧化，以及避免二級結(jié)構(gòu)的形成。如果序列中含有Cys和Met等易氧化的氨基酸，建議在充氮后低溫保存。
化學(xué)合成的肽通常帶有游離氨基和游離羧基。肽的序列通常代表親本蛋白質(zhì)的序列。為了更接近親本蛋白，肽末端往往需要封閉，即N末端乙酰化和C末端酰胺化，這些修飾會減少肽的總電荷，降低肽的溶解度，并且還使肽能夠模擬其母體蛋白質(zhì)中 α-氨基酸和羧酸基團的原始狀態(tài)。
如果需要N-末端的乙酰化修飾或C-末端的酰胺化修飾，請在下訂單時注明。一旦合成開始，C-末端酰胺化不能被修飾; 一旦合成完成，N-末端乙酰化不能被修飾。
肽生產(chǎn)的難度與其設(shè)計的序列直接相關(guān)，我們的技術(shù)人員可以更準(zhǔn)確地預(yù)測。如果設(shè)計的序列難以生產(chǎn)，不僅會影響實驗的進度，而且有時即使生產(chǎn)了產(chǎn)品，在使用中也會面臨各種問題，特別是溶解度問題。
基于它們的序列可以預(yù)測大多數(shù)肽是可溶的，一些序列更難以確定它們的溶解度并且需要實驗確認(rèn)。當(dāng)您設(shè)計序列時，我們可以為您提供更流暢的實驗建議。
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